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中药狗舌草研究概述

时间:2018-10-26 12:21作者:admin打印字号:

马智刚 王笑蕾 秦友平 黄葆华 初晓霞 范小莉  徐俊卿  张晓录
山东青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院  
课题资助:烟台市科学技术发展计划项目(项目编号:2007139-11)
通讯作者:马智刚
   狗舌草(英文名kirilowg roundsel,学名Tephroseriski rilowii (Turcz.) Holub)属于菊科狗舌草属,也有人把它归入千里光属[1,2,3],千里光属和狗舌草属植物通常含有双稠毗咯啶生物碱(Pyrrolizidine alkaloids ,PAs)。生于塘边、路边湿地、海拔800-2400m的草坡、林边、山坡及山沟。广布于我国北部、东北部及华东、西南各地。
 1.药物组分研究 
国外研究表明,狗舌草属植物主要含有双稠毗咯睫生物碱,如毛果天芥菜碱、倒千里光碱、狗舌草碱及千里光飞灵等[4,5]。陈进军等研究发现,狗舌草PAs总碱含量为0.104%(盛花期)和0.174%(早花期)[6]。王建华[7]等利用溶剂萃取法从狗舌草中得到总生物碱,通过色谱和波谱技术分离到4个双稠毗咯咙生物碱,分别为千里光宁、千里光非灵和全缘千里光碱和天芥菜定。陈进军[8]等用分项试管预试法和圆形滤纸层析法对狗舌草的化学成分进行了系统研究,表明狗舌草中主要含有水醇兼容性生物碱和黄酮类化合物,这是首次报告狗舌草中含有黄酮类化合物。
邱燕燕[9]等采用单因素和正交试验相结合的方法,对提取时间、提取温度、提取次数、料液比4个的提取工艺并进行了定性、定量试验。狗舌草总黄酮的最佳提取工艺:提取温度80℃,料液比1:10,提取时间3h,提取次数2次。最优提取工艺条件下的总黄酮提取率为0.523%,比色法测得总黄酮含量为6.897%。狗舌草总生物碱的最佳提取工艺:提取温度80℃,料液比1:10,提取时间3h,提取次数3次。最优提取工艺条件下的总生物碱平均提取率为0.211%。狗舌草总黄酮的分离纯化工艺优化,得较佳的吸附条件为:静置吸附时间为24h,上样液浓度为0.5mg/mL,上样液pH值为6-8,上样液加样流速为2BV/h。较佳的洗脱条件为:洗脱剂选用体积分数为70%乙醇,洗脱液pH值为6-8,洗脱剂体积为2.5BV,洗脱流速为2BV/h。
2.药理作用研究 
据《唐本草》和《浙江民问常用草药》等记载,狗舌草味苦、微甘,性寒,有小毒或无毒,具有清热、解毒、利尿、杀虫、活血消肿等功效。狗舌草用作清热解毒中草药,除了具有解痉抗溃疡作用之外,对白血病细胞、恶性网状细胞肉瘤及皮肤痛有较强的抑制作用。多个治疗白血病的配方,如“三舌汤,,和“复方403”中均含有狗舌草。苏州医学院以狗舌草、景天三七、土大黄构建了“复方403",对慢性白血病有一定疗效[10]
 对狗舌草的现代药理学研究资料很少。国内曾利用体外美蓝法证明,狗舌草对白血病有明显抑制作用。陈进军研究表明,狗舌草60%乙醇提取物主要含有水醇兼容性生物碱和黄酮类化合物,研究淋巴性白血病L1210细胞,以单猪屎豆碱、棚皮素和环磷酞胺为参照,通过L1210细胞台盼蓝拒染率的测定[11]。结果发现,一定剂量的狗舌草60%乙醇提取物具有明显的体外抑制淋巴性白血病L1210细胞的作用,这种作用具有明显的剂量依赖性。另外他们还建立淋巴性白血病L1210细胞荷瘤DBA/2小鼠模型[12],从荷瘤鼠T/C及腹围测定、荷瘤鼠腹水中细胞形态观察、荷瘤鼠白细胞象检查和骨髓象检查几方面,检查狗舌草60%乙醇提取物在体内对淋巴性白血病的作用效果。结果发现狗舌草60%乙醇提取物与单猪屎豆碱和棚皮素在体内抑制淋巴性白血病方面具有一致性。陈进军[13]等以环磷酞胺、棚皮素和单猪屎豆碱为参照,观察狗舌草60%乙醇提取物体外对L1210细胞的凋亡形态变化的影响;利用流式细胞术Annexin V -FITC/PI双参数法,研究狗舌草60%乙醇提取物对L1210细胞早期凋亡的影响。结果表明,狗舌草60%乙醇提取物能使L1210细胞发生典型的细胞凋亡,形成凋亡小体,诱导L1210细胞发生早期凋亡。研究还提示狗舌草60%乙醇提取物对L1210细胞增殖的抑制作用可能是由于G1期的阻滞所致[14],使L1210细胞周期动力学发生明显变化,细胞群主体分布于DNA合成静止的G1/GO期,进而诱导L1210细胞向淋巴细胞方向分化。
司红丽[15]等用MTT法检测狗舌草黄酮类化合物对3种不同肿瘤细胞的药物敏感试验表明,不同浓度的狗舌草黄酮类化合物均对肝癌细胞Hep-G不敏感;100ug/mL时对肝癌细胞HCC为中度敏感;在10ug/mL和100ug/mL时对淋巴性白血病细胞L1210分别为中度敏感和高度敏感,且半数致死浓度IC50为7.756g/mL。表明狗舌草中黄酮类化合物对L1210有很强的抑制作用。司红丽[16]等用改良寇氏法测定总黄酮的小鼠LD50为(1392.52士94.62 ) mg/Kg,属于中等毒性范围。初步表明可能与狗舌草的抗癌、抑癌作用有关。
马智刚[17,18,19,20]将U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用CCK-8试剂检测细胞毒作用,电镜观察细胞凋亡形态, DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI。结果:1.体外细胞毒实验显示狗舌草总提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制(质量)浓度约为3.2mg/L。2.电镜下,浓度为20mg/L狗舌草提取物作用3d后,细胞出现典型的凋亡特征。3.琼脂糖凝胶电泳结果发现,狗舌草提取物在作用U266细胞后均出现了典型的细胞凋亡DNA降解后的小分子片断梯形改变。4.在细胞周期分析研究上,随着药物浓度的增加, G0/ G1期细胞逐渐减少, S期, G2/ M期细胞增高。随着药物浓度的增加,凋亡细胞逐渐增多。5.在AnnexinV/PI方法检测细胞凋亡上,药物治疗组凋亡率有统计学差异,且随药物浓度升高而升高。总之,狗舌草提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。
总之,从以上研究来看,中药狗舌草在恶性肿瘤极具临床应用价值,应进一步深入研究,以获取新的药用成分。
 
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